但是也正是这一点,让这样的产品变得无比的亲民,全世界范围内多年霸榜,HCG的红杠杠经久不衰。新冠抗原,万民通鼻,其盛况无与伦比。
刚刚入行的时候,只知道胶体金这个名词,后来读了一些文献,知道了它的学名:侧向层析。Lateral Flow Chromatography。顾名思义,它是一项与分离相关的技术。Chroma词根是color,即颜色的意思,Graphy词根是描述。Chromatography原始的意思是色谱。谈到层析,最早接触的是化学中的薄层分离,通过在不同的介质中的迁移速度的差异,将混合物在薄层板上进行分离。柱层析也是常用的分离技术,有分子筛,离子交换以及亲和层析等等,生物化学应用十分广泛。
2、固相载体:从前端到后端,是样品垫,结合垫,NC膜和吸水滤纸搭建而成。
从加样孔开始,样本首先接触的是样品垫,这个样品垫的材质可以是玻纤,滤纸,聚酯膜或无纺布。所承载的是一个样品垫溶液的配方,很多技术人员对此很是痴迷。如果配方搞对了,效果相当的神奇,其实,这个配方主要就是几种缓冲系统(磷酸。TRIS以及硼酸)加上一定的盐离子、表面活性剂和一些封闭物质,所谓的产品调试,样品垫是一个主要的环节。再下面就是标记垫,它是标记物的一个载体,除了能吸附标记物,保持干燥状态,还必须层析过程中能够很好的释放标记物。标记垫的另一个功能是保持标记物的活性,所以蛋白稳定剂是必不可少的。很多菜鸟搞不出像样的T线,一脸懵逼,撬开塑料件一看,居然是结合垫的释放问题。NC膜是整个层析装置中最大的部件,也是核心部件,它是一种纤维膜,如图所示,电镜下面并不是规整的排列。NC膜有很多种规格,主要是根据孔径来分,孔径不同,流速也就不一样。所有的结合,分离,显色反应都在这个膜上面发生,相当于ELISA的酶标孔。
由于硝酸纤维的随机排列,不可能保证膜的每个地方都是均匀的,所以如果要进行精密的定量检测,层析方法是有先天的缺陷。整个层析检测是在流动相中发生,通过NC膜上的T或C线捕获结合物来显色,而这种捕获是瞬间的动态的过程,那么,就存在一个捕获的效率问题。这种效率与包被的浓度,抗原抗体的结合率,buffer的条件,以及膜的流速有很大的关系。我们曾经做过实验,就是同时划3条T线,最终,当结合物走过三条T线都有信号。说明,第一条T线结合后,残留的结合物很多。这种情况下,用于定性检测没问题,但是,要做准确的定量,计算起来就有些复杂了。设立C线是一个奇思妙想,其目的是设立一个系统的参照,首先告诉你检测的流动相是正常的,而且标记的抗体是存在的。后来,出于定量检测的计算需求,不知道是谁搞出一个T/C的比值,我始终没找到这个数值的理论依照。近年来比较风靡的所谓的独立C线,无非是出于C线的稳定性。侧向层析最高端的仪器应该是划膜仪,所谓高端,也就是精密的恒流泵和匀速电机相结合,将蛋白分别包被在T和C区域,经过适宜的温度的烘焙,就是大板的雏形。贴上样品垫,结合垫和滤纸,再切割成条就能够正常的使用了。生产的全部过程中,人工操作的工序步骤有些多,而且每个部件之间的搭桥比较多,这就是定量检测不准确的祸根。因为它不可控。和微流控相比,侧向层析是一种无驱动的层析。它的动力就是最后段的吸水滤纸。干燥,吸水力强的滤纸是流动的保障。所以,侧向层析产品的生产,最显著的特点是对于湿度的要求,在每一个生产环节,每一个部件的储存,保持干燥是第一要素。广东干不过杭州,是因为气候潮湿,那么为什么北京也干不过杭州呢?不知道。别认为将检测条套上塑料板只是因美观,对于塑料卡槽的设计,形状,坡度的不同,有时会大大改善层析的效果,使过程变得更可控。正因为如此,专门制造塑料卡槽的公司的生意也很火爆。就像代驾,活得很好。判定结果完全是靠肉眼,尽管对于一种科技型产品,通过肉眼判定结果,一下子变得有些粗糙和暴力。但是也正是这一点,让这样的产品变得无比的亲民,全世界范围内多年霸榜,HCG的红杠杠经久不衰。新冠抗原,万民通鼻,其盛况无与伦比。还是那句话:朴素的,就是最美的。